国内AAV基因治疗发展迅猛，如何快速有效的提高病毒载体的产能丨医麦猛爆料

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2021年7月26日/医麦客新闻 eMedClub News/--得益于基因治疗展现出的惊人潜力，同时递送系统在基因疗法中应用的逐渐成熟，基因治疗药物转化的壁垒被逐渐攻破。目前，基因治疗已经迈入了快速增长的黄金时代。

而国内近期也迎来了两款AAV体内基因治疗的监管动态：

• 2021年3月国家药监局批准了纽福斯首款眼科体内AAV基因治疗的IND；

• 2021年5月信念医药申报B型血友病AAV基因治疗，显示我国体内基因治疗已经进入到快速发展的时期。
  

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随着全身性基因治疗产品的临床推进，剂量的升高也对AAV的产量提出了更高要求，但是AAV的生产效率和成本仍然是一个业内亟待解决的问题。

事实上，如今的工业界已经开始从原来的血清培养基逐渐转向无血清培养基，这其中一部分原因是各大法规要求促进的改变，以及无血清培养基的优势，能够进一步降低病毒生产过程中的风险，提高基因治疗产品的竞争力。

相关法规要求

在可以预见下未来病毒类基因治疗产品将持续快速发展，为了更好的对这些产品进行监管，国家药监局出台了多项法规和政策，其中对生物制品生产过程中使用的各种原料来源提出了严格的质量控制要求。

2020年2月颁布，2020年12月30日正式实施的2020年版《中国药典》中，“生物制品病毒安全性控制”篇中，提出了对生物制品生产用原材料及辅料质量控制规程。其中重点提及动物源性生物材料，提及“应尽可能选择无病毒安全性风险或低风险的原材料和辅料用于生物制品生产，如选择采用重组技术生产的生物材料替代动物源性生物材料，或采用化学材料替代生物材料。”

原本，以病毒为最终产品的基因治疗如果在生产过程中使用含有动物血清培养基，那么在之后的环节中，必须要进行杂质去除、检测残留，但是又会引出一个问题——去除杂质后的病毒物是否达到了标准，因此就需要验证杂质去除工艺的效率。进一步增加了基因治疗产品的生产时间和经济成本。

无血清培养基优势

无血清培养基除了更加符合法规要求之外，还具有多重优势，能够进一步降低病毒生产过程中的风险，提高基因治疗产品的竞争力。

基于以上多重优势和监管法规的要求，无血清培养基快速发展，应用范围越发广泛，正在逐渐成为病毒/细胞培养主要的未来趋势。

降本增效的无血清培养基

Cytiva作为生物制药的优质供应商，贯穿从基础生物学研究到创新型疫苗的研发，从生物医药到新型细胞与基因疗法的研发。为了帮助基因治疗客户加速研究，降本增效，Cytiva开发了无血清细胞转染培养基——HyCell TransFx和SFM4Transfx-293培养基以及无血清细胞扩增培养基——HyClone CDM4HEK293培养基，在降低安全性风险的同时，支持细胞高密度培养，提高重组蛋白高表达和病毒载体产量。

利用Cytiva开发的无血清细胞培养基可以显著提升细胞转染效率

高效率转染1：HyCell TransFx培养基

这里通过实验设计（DOE）方法来优化HEK293T悬浮细胞系统中的rAAV生产，结果显示，在HyCell TransFx-H培养基中，通过一系列的变量优化，得到更高的转基因质粒浓度和更短的孵育时间。

HyCell TransFx-H是一种无动物源成分，无水解物，符合法规要求的培养基。其通用性使得该培养基支持多种HEK293细胞的直接驯化和高效率转染，并获得高细胞密度以及高蛋白产率。
HyCell TransFx-H培养基通过HyClone代谢途径设计方法进行开发，在转染和重组蛋白瞬时表达上能够提供优化一致的效果和最大化的蛋白产量，可支持HEK293细胞的培养体积从200μL到更大规模的生产体积。HyCell TransFx-H中瞬时表达重组蛋白的HEK293细胞生长情况，活率和产率曲线
高效率转染2：SFM4Transfx-293培养基除了以上提到的HyCell TransFx-H，SFM4Transfx-293也是一款无血清和无动物源成分的培养基，支持HEK293细胞的生长，并且在使用转染试剂或类似方式时促进转染过程。
这种符合法规要求的培养基是通过HyClone代谢通路设计研发的，在悬浮培养情况下支持更高的转染效率，高细胞密度和高蛋白产率。可提供液体和干粉形式，对特定要求的工艺SFM4Transfx-293可提供定制配方和供料系统。

利用无血清细胞培养基可以维持悬浮细胞高密度培养并显著提升AAV的产量

高病毒滴度：HyClone CDM4HEK293

HyClone CDM4HEK293是一种化学成分限定的培养基，可用于培养人类胚胎肾细胞(HEK293细胞)。该款培养基是一种无蛋白和无动物源成分的培养基，可促进腺病毒和重组蛋白生产。

这种符合法规要求的培养基是通过HyClone代谢通路设计研发的，以支持悬浮细胞培养状态下的极高产率和细胞密度。可提供液体或干粉形式，对特定要求的工艺CDM4HEK293可提供定制配方和供料系统。

在HyClone CDM4HEK293培养基中，通过一系列的对比实验，得到在高密度悬浮培养下细胞仍然维持高活性，且获得的病毒滴度更高。

HyClone CDM4HEK293 在不同的培养设备下高密度培养细胞活率和滴度
针对AAV产业化生产的三款无血清细胞培养基可支持：

• 无动物源成分配方

• 更高的转染效率

• 被设计用于支持细胞高密度培养，重组蛋白高表达量和病毒载体高产量

• 直接驯化和连续驯化

• 按照cGMP指南采用可溯源原料进行生产

HyCell TransFx-H培养基订货信息：

SFM4Transfx-293培养基订货信息：

HyClone CDM4HEK293订货信息：

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课程主题：AAV基因药物上游无血清工艺开发策略

课程提纲：

1. AAV基因药物上游细胞株：HEK293细胞的背景信息

2. HEK293细胞的悬浮驯化、转染过程优化及案例分享

3. HyClone HEK293细胞无血清培养基介绍及应用策略

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